Według statystyk WHO w ciągu ostatnich 40 lat na AIDS zmarło 25 milionów ludzi. Szkody spowodowane tą infekcją są ogromne. Większość zarażonych znalazła się w Afryce, skąd pochodzi ta infekcja. W przypadku HIV diagnoza choroby staje się szczególnie istotna. To prawda, że nie ma jeszcze lekarstwa na HIV, ale wczesne leczenie może przedłużyć życie pacjenta i poprawić jego jakość.
Diagnoza zakażenia wirusem HIV
Zakażenie HIV jest określane na różnych etapach za pomocą następujących metod:
- ELISA - test immunoenzymatyczny.
- Western blot.
- PCR - łańcuchowa reakcja polimerazy.
- Szybkie testy.
Metoda PCR została opracowana przez amerykańskiego biochemika Kary Mullisa, który otrzymał za nią Nagrodę Nobla w 1983 roku. Dziś ta metoda w medycynie w diagnostyce wszystkich infekcji uważana jest za wiodącą ze względu na swoją dokładność i zawartość informacyjną. HIV nie jest pod tym względem wyjątkiem.
Istota analizy
Każda żywa komórka zawiera RNA i DNA. Te kwasy nukleinowe są zdolne do samokopiowania i samoreplikacji. Dla każdej infekcji fragmenty DNA są unikalne. Ww płynach biologicznych te fragmenty kwasów nukleinowych krążą. Są wychwytywane i rozpoznawane przez specjalny sprzęt – reaktor. To jest podstawa metody. Asystent laboratoryjny liczy te fragmenty. Retrowirus HIV jest monitorowany pod kątem RNA. Nawet w przypadku pojedynczych kopii cząsteczek wirusa, PCR może je wykryć i zliczyć.
Krew żylna jest najczęściej używana jako płyn testowy. Specjalne składniki metody wiążą się z cząsteczkami wirusa i czynią je wykrywalnymi, ponieważ znalezione fragmenty są mnożone.
W przypadku HIV wynik obecności wirusa można uzyskać na długo przed pojawieniem się kliniki. Dlatego PCR ze względu na wysoką czułość ma tak wysoką wartość diagnostyczną. Ogromnym plusem PCR jest wszechstronność metody. Okres inkubacji infekcji dla PCR nie jest przeszkodą.
Koszt badań
Metoda PCR jest dość kosztowna. To jedna z jego dużych wad. Wymaga najnowszego sprzętu i wysoko wykwalifikowanego asystenta laboratoryjnego. W związku z powyższym diagnostyka PCR nie jest wykonywana w małych miejscowościach. Badanie można wykonać tylko w wyspecjalizowanych dużych klinikach.
Koszt testów DNA na HIV w moskiewskich klinikach zaczyna się od 2800 rubli, obciążenie wirusem (wirusowy RNA w osoczu) określa się metodą PCR - od 8800 rubli, a odporność HIV na inhibitory proteazy - od 16500 rubli. Jak widać, ceny są dość wysokie. PCR można wykonać bezpłatnie w przychodniach publicznych w ramach polityki MHI. Ważny,że procedura może być wykonana anonimowo. W rejestrze pacjent otrzymuje numer, pod którym może sprawdzić wynik. W nowoczesnych placówkach medycznych istnieją konta osobiste klientów, na których te dane będą wprowadzane.
Cele badań
Diagnostyka PCR w kierunku HIV jest zalecana w takich przypadkach:
- Wykrywanie infekcji u dziecka urodzonego przez chorą matkę lub nosicielkę w celu określenia infekcji wewnątrzmacicznej.
- Jeśli test ELISA dał wątpliwe wyniki (PCR dla HIV pomaga w tym przypadku postawić ostateczną diagnozę).
- Wykrywanie ilościowej zawartości wirusa w organizmie.
- Dzięki pozytywnemu immunoblotowi uzupełniają się one nawzajem metodą PCR.
- Testowanie dawców.
- Do wczesnej diagnozy HIV.
- Aby określić skuteczność i odporność na ART.
Zaletą tej analizy jest to, że PCR na HIV można przeprowadzić nawet dla dzieci poniżej pierwszego roku życia.
Badania są często przeprowadzane nie dla podstawowej diagnozy, ale już w trakcie leczenia. Podstawowa diagnostyka to badania serologiczne (określają poziom przeciwciał przeciwko HIV). Jeśli wynik fałszywie dodatni się powtórzy, może to oznaczać niski poziom wiremii.
PCR diagnozuje HIV, gdy nie ma jeszcze przeciwciał. Metoda ELISA w tym przypadku nie da odpowiedzi.
I PCR na HIV będzie już pozytywny. Ale objawy tego okresu HIV są niespecyficzne. Pacjent jest najpierw długo i bezskutecznie leczony z powodu ARVI przez lekarza pierwszego kontaktu. Należy pamiętać, że diagnoza HIV opiera się wyłącznie naPCR nie jest umieszczany, konieczne jest zdanie innych kompleksowych testów. Metoda PCR jest częściej pomocna w trudnych przypadkach.
Przygotowanie do analizy
Przed wykonaniem testu PCR na HIV, 2 dni przed badaniem, nie należy spożywać tłustych potraw, alkoholu. Lepiej też nie przemęczać się psychicznie i fizycznie. Jeśli pacjentowi przepisano kurs immunostymulacji, przerywa się go na 2 tygodnie przed analizą.
Krew najlepiej przyjmować rano. Można również badać inne płyny biologiczne organizmu (plemniki, wydzieliny pochwowe), ale najlepszym materiałem jest krew. Nie używa się śliny, potu, moczu i łez, ponieważ zawartość wirusa w nich jest minimalna.
Plusy PCR na HIV
Zaletami tej metody są niezwykle niskie prawdopodobieństwo wyniku fałszywie dodatniego, uniwersalność reakcji na dowolne płyny biologiczne organizmu. Analiza ma szeroki zakres:
- Jedno pobranie krwi może być użyte do wykrycia różnych infekcji.
- Technika jest pilna, wynik jest gotowy już następnego dnia.
- Zaufanie wynosi od 85 do 98%.
- Obecność wirusa HIV można określić 10-14 dni po zakażeniu (w tej chwili nie ma jeszcze przeciwciał).
- Brak limitu wieku, można wykonać natychmiast od urodzenia.
Wady metody
Wady PCR są następujące:
- Koszt analizy.
- Wymaga zaawansowanego sprzętu medycznego.
- Wymaga wysoko wykwalifikowanego asystenta laboratoryjnego i lekarza,analiza przyjmującego.
- Reakcja jest bardzo wrażliwa, więc błąd może wynosić 20%.
- Może skutkować fałszywie dodatnim wynikiem, jeśli pacjent ma procesy autoimmunologiczne, onkologię, przewlekłe infekcje.
- Konieczna jest szczególna czystość pomieszczeń laboratoryjnych, ponieważ wirus może dostać się do analizy z powietrza. Wtedy wynik będzie błędny.
Dla laboratoriów przeprowadzających PCR, w celu poprawy jakości diagnostyki, zostały opracowane specjalne rygorystyczne środki zgodnie z systemem kontroli wewnętrznej SanPiN. Ponadto należy przestrzegać wszystkich zasad pracy z tą techniką:
- Wymagane ścisłe przestrzeganie informacji na probówkach.
- Przed pobraniem krwi spójrz ponownie i upewnij się, że analiza jest zaplanowana.
- Pielęgniarka musi prawidłowo oznaczyć probówki.
- Asystent laboratoryjny musi prawidłowo wykonywać wszystkie manipulacje z biomateriałem, aby zapobiec zanieczyszczeniu krzyżowemu.
- System testowy musi być doskonałej jakości.
Tylko jeśli wszystkie te warunki są spełnione, błąd w odpowiedzi może wynosić tylko około 2% odcinków.
Czas trwania analizy
Wielu jest zainteresowanych tym, jak długo będzie gotowa metoda PCR na HIV. Diagnoza trwa nie dłużej niż 8 godzin. Pacjent może otrzymać odpowiedź już następnego dnia. Testy ekspresowe są wykonywane w ciągu 2 godzin.
Niezawodność PCR
Pomimo wielu zalet metoda PCR nie jest uważana za idealną metodę diagnostyczną. Kontaktuje się z nim w przypadkukonieczność wykonania badań przesiewowych na obecność wirusa HIV w organizmie.
Kiedy krew jest pobierana do analizy?
Jak długo trwa test PCR na HIV? Wiarygodny wynik można uzyskać już po pobraniu krwi 4-4 dni po rzekomej infekcji. Po 2 tygodniach wiarygodność dla HIV wyniesie 98%, a po 5 dniach - 80%. Obecność ujemnego wyniku w PCR na HIV będzie wiarygodna, ale w celu uzyskania absolutnie dokładnego wyniku przeprowadza się również test ELISA.
Analiza ELISA będzie skuteczna tylko w przypadku obecności przeciwciał przeciwko wirusowi, tym razem może to zająć od 1-3 miesięcy do sześciu miesięcy. Ponieważ test ELISA daje większe prawdopodobieństwo (98% -99,9%), PCR nie można nazwać testem potwierdzającym 100% na obecność zakażenia HIV. Ale z drugiej strony jest to jedyna technika, w której nie trzeba czekać na pojawienie się przeciwciał.
W przypadku HIV, PCR może dostarczyć informacji o skuteczności ART, stadium choroby HIV i liczbie VN (ilościowa ocena obecności HIV w organizmie). Będzie to świadczyło o powadze i zakresie zmiany.
Testy PCR na obecność wirusa HIV są również konieczne, jeśli we krwi znajdują się przeciwciała, ale ich obecność nie wskazuje na kliniczną wiarygodność zakażenia HIV.
Są testowane nie tylko pod kątem infekcji i przypadkowego seksu. Inne okazje:
- Planowanie ciąży.
- Nadchodząca operacja.
- Seks na co dzień.
- Niektóre zawody wymagają tego testu w celu przyjęcia do pracy (nauczyciele, lekarze i inny personel medyczny).
- Więźniowie.
- pacjenci z gruźlicą.
- Pracownicy Ministerstwa Sytuacji Nadzwyczajnych i policji.
- Wrócił z wakacji z egzotycznych krajów (jeśli chcesz się upewnić, że nie ma infekcji).
- Prostytutki.
- Zagraniczni studenci.
- Leki.
Ponadto pewne objawy u pacjenta mogą wymusić wykonanie testu na obecność wirusa HIV:
- Nagła utrata wagi.
- Biegunka trwająca dłużej niż 3 tygodnie
- Nieuzasadniona wysoka temperatura przez długi czas.
- Obrzęk węzłów chłonnych.
- Niewyjaśniona przyczyna zapalenia płuc, kandydozy itp.
Odszyfrowanie analizy jest przywilejem lekarza prowadzącego, a nie asystenta laboratorium.
PCR czy ELISA, co jest lepsze?
Gdy diagnoza PCR wirusa HIV zostanie wykryta zarówno jakościowo, jak i ilościowo. Ta analiza wyraźnie identyfikuje konkretny patogen, nawet jeśli istnieje kilka patogenów reagujących krzyżowo. Materiał biologiczny można stosować nawet w postaci wysuszonej. Minusem jest wysoka czułość PCR, gdy fałszywie dodatni wynik może być wynikiem obecności nawet niewielkiej ilości obcego DNA na instrumentach lub probówce.
Zadaniem i możliwością testu ELISA jest określenie obecności przeciwciał przeciwko retrowirusowi. Chociaż jego dokładność wynosi 99%, nie ma zastosowania na wczesnych etapach.
Jakościowe badanie na obecność wirusa HIV
Wysokiej jakości PCR na HIV określa obecność wirusa w organizmie. Wyniki w tym przypadku będą wyglądać tak: pozytywne, fałszywie pozytywne, negatywne. Ale to badanie nie dostarczy informacji o ilości retrowirusa. Taka analiza jakościowanieodpowiednie, gdy zakażenie wirusem HIV zostało już wykryte w organizmie innymi sposobami.
Nie można kontrolować skuteczności leczenia za pomocą wysokiej jakości PCR.
Ocena ilościowa HIV
Wykonywane wyłącznie przez osoby zakażone wirusem HIV w celu zliczenia liczby kopii RNA wirusa w produkcie biologicznym.
Celem takiego badania jest monitorowanie trwającego leczenia i identyfikacja oporności wirusa na nie. Terapia przeciwwirusowa w takich obliczeniach nie jest ślepo przepisywana przez lekarza, więc będzie bardziej skuteczna. Znacznie częściej wykonywana jest ilościowa reakcja PCR na zakażenie wirusem HIV. Ta analiza jest wyświetlana jako kopia/ml krwi.
Jakie wyniki można uzyskać:
- RNA wirusa jest nieobecne lub bardzo małe (około 20 kopii/ml). Brak pewności diagnozy.
- Od 20 - do 10 do 6 kopii / ml - diagnoza jest wiarygodna.
- Ponad 106 kopii/ml - wysoki VN.
Laboratoria mogą przeprowadzać testy PCR w czasie rzeczywistym na obecność wirusa HIV. Oznacza to obserwację i ocenę numeryczną akumulacji produktów PCR z automatycznym zapisem wyników.
