Metoda kolorymetryczna - analiza oparta na porównaniu nasycenia barw badanych i znanych substancji. Wyniki badań fizykochemicznych mają ogromną wartość dla wielu dziedzin nauki, ale przede wszystkim są wykorzystywane w medycynie.
Istota metody kolorymetrycznej
Istnieje wiele rodzajów testów, które określają skład chemiczny substancji. Niektóre z nich są uniwersalne i mają szerokie zastosowanie w różnych dziedzinach, inne są specyficzne, z większą dokładnością. Metoda kolorymetryczna jest uniwersalna.
Istota analizy polega na tym, że nasycenie koloru roztworu o nieznanym stężeniu jest porównywane z kolorem roztworu wzorcowego. Podczas analizy w wyniku oddziaływania badanego składnika z określonym odczynnikiem powstaje barwny związek. Po zakończeniu reakcji uzyskany odcień porównuje się z kolorem roztworów, których stężenie jest już znane.
Uważa się, że twórcą kolorymetrii jest Robert Boyle. Użył ściśnięciagarbniki w celu odróżnienia żelaza od miedzi w roztworze. To właśnie Boyle zauważył, że im większe stężenie żelaza w roztworze, tym bogatszy ton tego ostatniego.
Kolorymetria
Kolorymetria to metoda określania ilości substancji w roztworach. Analiza opiera się na prawie Bouguera-Lamberta-Beera: kiedy wiązka światła uderza w gęstą absorbującą warstwę substancji, jej intensywność słabnie.
Kolorymetryczna metoda określania stężenia substancji może wykorzystywać wizualne porównanie lub porównanie przy użyciu specjalnych przyrządów do pomiaru intensywności koloru. Porównanie jest dokonywane w sposób bezpośredni i kompensacyjny.
- Prosto. Metoda polega na porównaniu poziomu zabarwienia roztworu testowego o określonej gęstości i temperaturze cieczy z roztworem odniesienia. Przy stosowaniu fotokolorymetrów i spektrofotometrów jako roztwór odniesienia stosuje się wodę destylowaną. Urządzenia mierzą natężenie prądu, które zależy od natężenia światła.
- Odszkodowawcze. Metoda polega na doprowadzeniu barwy badanej próbki do wzorca. Efekt uzyskuje się poprzez dodanie rozpuszczalnika lub zwiększenie wysokości warstwy barwionego medium.
Zastosowanie spektrofotometru, monochromatora i innych precyzyjnych przyrządów dodatkowo upraszcza i tak już prostą metodę badawczą i pozwala na zwiększenie dokładności wyników. Urządzenia te są w stanie zmierzyć ilość przepuszczanego światła i określić długość fali.
Gdzie stosowana jest analiza
Kolorymetryczną metodę analizy stosuje się, gdy znany jest dokładny skład chemiczny, istnieje próbka referencyjna do porównania, a temperatura próbki testowej i referencyjnej jest taka sama. Jeśli potrzebujesz szybko określić ilość barwionej substancji, ale jest ona tak mała, że nie da się zastosować metody analitycznej.
Kolorymetria jest szeroko stosowana w medycynie do klinicznych badań biochemicznych i innych dziedzinach:
- przemysł farmaceutyczny;
- przemysł spożywczy i alkoholowy;
- agronomia (określanie jakości gleby).
Wady i zalety
Metoda kolorymetryczna, jak każda inna, ma wady i zalety.
Zalety obejmują:
- łatwość analizy, minimalne procedury przygotowawcze;
- możliwość testowania nawet z niewielką ilością materiału testowego;
- nie ma potrzeby stosowania drogiego sprzętu, chociaż w ostatnim czasie coraz częściej stosuje się nowoczesne urządzenia, które nie są tanie. Ale zapewniają najdokładniejszy wynik.
Wady: niska dokładność analizy w porównaniu z metodami analitycznymi.
Biuretowa metoda oznaczania białka
Białko w surowicy krwi jest wskaźnikiem odzwierciedlającym stan homeostazy. Wzrost stężenia związku wielkocząsteczkowego we krwi nazywamy hiperproteinemią, niski poziom nazywamy hipoproteinemią.
Białka wsurowica ma inny skład, strukturę, właściwości, pełnią różne funkcje. Dzielą się na enzymy, hormony, immunoglobuliny i inne. Wszystkie grupy białek posiadają szereg cech wspólnych, na podstawie których opracowano metody oznaczania wielkocząsteczkowych związków organicznych w płynach biologicznych.
Spośród wszystkich metod biochemii klinicznej najczęściej stosowane są metody kolorymetryczne do oznaczania białka. Są stosunkowo tanie, co jest ważne dla organizacji budżetowych. i są dość proste. Najbardziej powszechna jest metoda biuretowa. Istota metody: białka w środowisku alkalicznym reagują z siarczanem miedzi i tworzą fioletowe związki. Zawartość białka we krwi zależy od nasycenia barwienia. Biomateriał do analizy pobierany jest rano na czczo.
Analiza jest bardzo dokładna, ale istnieją czynniki, które wpływają na stężenie białka we krwi:
- aktywność fizyczna na krótko przed pobraniem próbek biomateriałów;
- ostatnie tygodnie ciąży i laktacji;
- stosowanie leków Corticotropin, Miscleron, Clofibrat zwiększa zawartość białka we krwi, a stosowanie Pyrazinamidu i estrogenu - w celu zmniejszenia stężenia;
- niewłaściwa pozycja dłoni podczas pobierania próbek biomateriałów.
Oznaczanie żelaza
Ilość żelaza we krwi jest jednym z głównych wskaźników w diagnostyce różnych chorób. Substancja jest skoncentrowana w hemoglobinie, co zapewnia transport tlenu do tkanek. Dooznaczanie żelaza metodą kolorymetryczną, najczęściej jako główny odczynnik stosuje się roztwór batofenantroliny (0,02%). Biomateriał - surowica bez śladów hemolizy.
Istota metody: oddziaływanie jonów żelazawych i siarczanowanej batofenantroliny tworzy barwny kompleks, którego nasycenie określa się fotometrycznie. Aby uzyskać klarowny roztwór, konieczne jest przestrzeganie zasad pobierania próbek biomateriału, ale aby dokładnie określić gęstość optyczną kompleksów żelazo-ligand, żelazo jest uwalniane z hemoglobiny za pomocą hydroksyloaminy i detergentów (dodecylosiarczan sodu). Wynik testu określa obecność i stopień patologii. Normalne stężenie żelaza powinno wynosić:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (mężczyźni);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (kobiety).
Niedobór żelaza jest zwykle związany z utratą krwi, nieodpowiednim przyjmowaniem w diecie lub słabym wchłanianiem z przewodu pokarmowego.
Test cholesterolu
Cholesterol to substancja organiczna występująca w ścianach komórkowych wielu organizmów, w tym ludzi. Jest niezbędny do produkcji cholekalcyferolu i hormonów steroidowych. Poziom cholesterolu 3,37-5,2 mmol/l jest uważany za prawidłowy. Podwyższona zawartość jest jedną z głównych przyczyn miażdżycy.
Kolorymetryczne metody oznaczania cholesterolu pozwalają na wczesne rozpoznanie chorób naczyniowych. Zgodnie z wynikami patoanatomicznymi w śmiertelnym wyniku niedokrwienia, stężenie alkoholu lipofilowego u pacjentówwynosiła 6,5-7,8 mmol/L.
Zasada metody kolorymetrycznej polega na tym, że cholesterol jest utleniany przez oksydoreduktazę 3beta-hydroksysteroidową, uwalniając nadtlenek wodoru, który przekształca p-aminoatypirynę w barwny związek. Zawartość cholesterolu określa nasycenie jego koloru.
Podczas przeprowadzania testu u dziecka należy wziąć pod uwagę, że stężenie cholesterolu w dzieciństwie nie powinno przekraczać 4,1 mmol / l.
Co to jest enzymatyczna metoda kolorymetryczna?
Testy enzymatyczne opierają się na wykorzystaniu reakcji enzymów o wysokiej aktywności. Są szeroko stosowane w chemii analitycznej do oznaczania różnych substancji - od jonów azotanowych po makrocząsteczki.
Metody enzymatyczne (enzymatyczne) są specyficzne, pozwalając na analizę niektórych substancji w obecności innych substancji o podobnym składzie. Najczęstsze metody opierają się na wykorzystaniu enzymu – oksydazy glukozowej. Test służy do określenia stężenia glukozy we krwi. Dokładność testu pozwala na jego wykorzystanie do dostosowania dawkowania leków hipoglikemizujących u pacjentów z cukrzycą typu 2.
Metoda utleniania glukozy jest uważana za jedną z najlepszych ilościowych metod oznaczania glukozy. Jako biomateriał można stosować zarówno krew (kapilary), jak i surowicę, ale osocze jest bardziej preferowane, ponieważ ma niższą zawartość hematokrytu, co negatywnie wpływa na dokładność wyniku.
Wykorzystywana jest głównie metoda fotometrii kinetycznej. Jego istota polega na tym, żeustalony stosunek oksydazy glukozowej i peroksydazy, przez pewien czas po rozpoczęciu reakcji szybkość tworzenia barwnego związku będzie współmierna do poziomu glukozy w próbce. Główną zaletą testu jest to, że na wynik nie ma wpływu obecność w próbce związków obcych. Metoda ma również wadę – do badania potrzebne są drogie przyrządy pomiarowe producentów niemieckich lub szwedzkich.
Wniosek
Metoda kolorymetryczna jest dokładna i łatwa w użyciu. Jego zastosowanie w medycynie pozwala na wczesne wykrycie różnych zmian patologicznych w organizmie. Wraz z wprowadzaniem nowych technologii metoda jest udoskonalana i staje się coraz bardziej popularna.
