Badania bakterii mają ogromne znaczenie praktyczne dla ludzi. Do chwili obecnej odkryto dużą liczbę prokariotów, które różnią się od siebie patogennością, obszarem występowania, kształtem, wielkością, liczbą wici i innymi parametrami. Do szczegółowego zbadania tego szczepu stosuje się metodę badań bakteriologicznych.
Jakie są metody analizy komórek bakteryjnych?
Aby ustalić, czy bakterie są patogenne, kultura jest badana na różne sposoby. Wśród nich:
1. Metoda bakterioskopowa.
2. Metoda bakteriologiczna.
3. Metoda biologiczna.
Baterioskopowe i bakteriologiczne metody badawcze opierają się bezpośrednio na pracy z komórkami prokariotycznymi, gdy do zbadania wpływu takich komórek na żywy organizm zwierząt doświadczalnych wymagana jest analiza biologiczna. W zależności od stopnia manifestacji pewnych objawów choroby naukowiec może dokonaćwnioski dotyczące obecności lub nieobecności bakterii chorobotwórczych w próbce, a także naturalnego rozmnażania ich w organizmie zwierzęcia w celu uzyskania ich kultury i wykorzystania w innych pracach.
Bakteriologiczna metoda badań różni się od bakterioskopii. W pierwszym do analizy wykorzystuje się specjalnie przygotowaną hodowlę żywych prokariotów, natomiast w drugim prace prowadzone są z martwymi lub żywymi komórkami na szklanym szkiełku.
Etapy metody badań bakteriologicznych. Mikrobiologia
Zasada badania właściwości kultury bakteryjnej może być przydatna zarówno dla mikrobiologów, którzy postawili sobie za cel badanie komórek prokariotycznych, jak i dla techników laboratoryjnych, których zadaniem jest ustalenie patogeniczności lub niepatogenności bakterii oraz następnie zdiagnozuj pacjenta.
Metoda badania bakterii jest podzielona na trzy etapy:
1. Izolacja bakterii z oryginalnej próbki.
2. Wysiew bakterii i hodowla czystej kultury, badanie jej właściwości.
3. Szczegółowe badanie komórek bakteryjnych.
Pierwszy etap
Próbka lub rozmaz jest pobierana z wolnej powierzchni podłoża lub od pacjenta. W ten sposób otrzymujemy „koktajl” wielu rodzajów bakterii, które należy zasiać na pożywce. Czasami możliwe jest natychmiastowe wyizolowanie niezbędnych bakterii, znając ich ogniska dystrybucji w organizmie.
Po dwóch lub trzech dniach wybrane kolonie są wybierane iwysiewa się na stałe podłoża szalek Petriego za pomocą sterylnej ezy. Wiele laboratoriów pracuje z probówkami, które mogą zawierać pożywki stałe lub płynne. Tak realizowana jest bakteriologiczna metoda badań w mikrobiologii.
Drugi etap
Po uzyskaniu pojedynczych kolonii bakterii przeprowadzana jest bezpośrednia makro- i mikroanaliza. Mierzone są wszystkie parametry kolonii, określany jest kolor i kształt każdej z nich. Nierzadko liczy się kolonie na szalce Petriego, a następnie w materiale wyjściowym. Ma to znaczenie w analizie bakterii chorobotwórczych, których liczba zależy od stopnia zaawansowania choroby.
Bakteriologiczna metoda badań, której drugim etapem jest badanie poszczególnych kolonii mikroorganizmów, może być powiązana z biologiczną metodą analizy bakterii. Kolejnym celem pracy na tym etapie jest zwiększenie ilości materiału źródłowego. Można to zrobić na pożywce lub przeprowadzić eksperyment in vivo na żywych organizmach doświadczalnych. Bakterie chorobotwórcze będą się namnażać, w wyniku czego krew będzie zawierać miliony komórek prokariotycznych. Przygotowanie niezbędnego materiału roboczego bakterii z pobranej krwi jest łatwe.
Trzeci etap
Najważniejszą częścią badania jest określenie właściwości morfologicznych, biochemicznych, toksygennych i antygenowych kultury bakteryjnej. Prace prowadzone są na wstępnie oczyszczonych kulturach na pożywce, a także preparatach (często barwionych) pod mikroskopem.
Ustaw własnośćbakterie chorobotwórcze lub oportunistyczne do tej lub innej systematycznej grupy, a także określenie ich oporności na leki, pozwala na bakteriologiczną metodę badań. Etap 3 - antybiotyki, czyli analiza zachowania komórek bakteryjnych w warunkach zawartości leków w środowisku.
Badanie antybiotykooporności kultury ma ogromne znaczenie praktyczne, gdy konieczne jest przepisanie niezbędnych, a co najważniejsze, skutecznych leków dla konkretnego pacjenta. Tutaj może pomóc metoda badań bakteriologicznych.
Co to jest podłoże wzrostu?
W celu rozwoju i rozmnażania bakterie muszą znajdować się we wcześniej przygotowanych pożywkach. Ze względu na konsystencję mogą być płynne lub stałe, a ze względu na pochodzenie - roślinne lub zwierzęce.
Podstawowe wymagania dotyczące nośników:
1. Sterylność.
2. Maksymalna przejrzystość.
3. Optymalne wskaźniki kwasowości, ciśnienia osmotycznego, aktywności wody i innych wartości biologicznych.
Uzyskiwanie izolowanych kolonii
1. Metoda Drygalskiego. Polega na tym, że na pętlę bakteryjną nanosi się rozmaz z różnego rodzaju drobnoustrojami. Ta pętla jest prowadzona wzdłuż pierwszej szalki Petriego z pożywką. Ponadto, bez zmiany pętli, metodę pozostałości materiału przeprowadza się na drugiej i trzeciej płytce Petriego. Tak więc na ostatnich próbkach kolonii bakterie nie zostaną wysiane zbyt gęsto, co ułatwi znalezienie niezbędnych do pracy.bakterie.
2. Metoda Kocha. Wykorzystuje probówki ze stopioną pożywką. Tam umieszcza się ezę lub pipetę z rozmazem bakterii, po czym zawartość probówki wylewa się na specjalną płytkę. Agar (lub żelatyna) po pewnym czasie zestala się iw jego grubości łatwo jest znaleźć pożądane kolonie komórek. Ważne jest, aby przed rozpoczęciem pracy rozcieńczyć mieszaninę bakterii w probówkach, aby stężenie mikroorganizmów nie było zbyt wysokie.
Bateriologiczna metoda badań, której etapy opierają się na izolacji pożądanej kultury bakterii, nie może obejść się bez tych dwóch metod wyszukiwania izolowanych kolonii.
Antybiogram
Widocznie reakcję bakterii na leki można zaobserwować na dwa praktyczne sposoby:
1. Metoda tarczy papierowej.
2. Rozmnażanie bakterii i antybiotyków w płynnej pożywce.
Metoda papierowego krążka wymaga hodowli mikroorganizmów, które zostały wyhodowane na stałym podłożu odżywczym. Na takie podłoże położyć kilka kawałków zaokrąglonego papieru nasączonego antybiotykami. Jeśli lek z powodzeniem poradzi sobie z neutralizacją komórek bakteryjnych, po takim zabiegu pojawi się obszar pozbawiony kolonii. Jeśli reakcja na antybiotyk jest negatywna, bakterie przeżyją.
W przypadku stosowania pożywki płynnej należy najpierw przygotować kilka probówek z kulturą bakterii o różnych rozcieńczeniach. Do tych probówek dodawane są antybiotyki, a w ciągu dnia obserwuje się proces interakcji między substancją a mikroorganizmami. W efekcie otrzymuje się wysokiej jakości antybiogram, zgodnie z którym możliwe jest:ocenić skuteczność leku dla danej uprawy.
Główne zadania analizy
Tu wymieniono cele i etapy bakteriologicznej metody badań.
1. Zdobądź materiał wyjściowy, który zostanie użyty do izolacji kolonii bakteryjnych. Może to być wymaz z powierzchni dowolnego przedmiotu, błony śluzowej lub jamy ludzkiego narządu, badanie krwi.
2. Uprawa kultury na pożywce stałej. Po 24-48 godzinach na szalce Petriego można znaleźć kolonie różnych typów bakterii. Wybieramy żądany zgodnie z kryteriami morfologicznymi i/lub biochemicznymi i prowadzimy z nim dalsze prace.
3. Propagacja powstałej kultury. Metoda badań bakteriologicznych może opierać się na mechanicznej lub biologicznej metodzie zwiększania liczby kultur bakteryjnych. W pierwszym przypadku prace prowadzone są na pożywkach stałych lub płynnych, na których bakterie rozmnażają się w termostacie i tworzą nowe kolonie. Metoda biologiczna wymaga naturalnych warunków do zwiększenia liczby bakterii, więc tutaj zwierzę doświadczalne zostaje zakażone drobnoustrojami. Po kilku dniach w próbce krwi lub rozmazie można znaleźć wiele prokariotów.
4. Praca z kulturą oczyszczoną. Aby określić systematyczną pozycję bakterii, a także ich przynależność do patogenów, konieczne jest przeprowadzenie dokładnej analizy komórek pod kątem cech morfologicznych i biochemicznych. Podczas badania chorobotwórczych grup mikroorganizmów ważne jest, aby wiedziećjak skuteczne są antybiotyki.
To była ogólna charakterystyka metody badań bakteriologicznych.
Cechy analizy
Główną zasadą badań bakteriologicznych jest maksymalna sterylność. Jeśli pracujesz z probówkami, kultury i subkultury bakterii powinny być przeprowadzane tylko nad rozgrzaną lampą spirytusową.
Wszystkie etapy metody badań bakteriologicznych wymagają użycia specjalnej pętli lub pipety Pasteura. Oba narzędzia muszą być wstępnie obrobione w płomieniu lampy alkoholowej. Jeśli chodzi o pipetę Pasteura, tutaj przed sterylizacją termiczną konieczne jest oderwanie końcówki za pomocą pęsety.
Technika wysiewu bakterii ma również swoje własne cechy. Po pierwsze, podczas zaszczepiania na podłożu stałym pętla bakteryjna przechodzi przez powierzchnię agaru. Pętla oczywiście powinna już mieć na powierzchni próbkę mikroorganizmów. Praktykuje się również zaszczepianie pożywki hodowlanej, w którym to przypadku eza lub pipeta powinny sięgać dna szalki Petriego.
Podczas pracy z mediami płynnymi używa się probówek. Tutaj ważne jest, aby płyny nie dotykały krawędzi szkła laboratoryjnego ani korków, a używane narzędzia (pipeta, pętla) nie dotykały ciał obcych i powierzchni.
Znaczenie metody badań biologicznych
Analiza próbki bakterii ma swoje praktyczne zastosowania. GłównieMetoda badań bakteriologicznych może być stosowana w medycynie. Na przykład konieczne jest zbadanie mikroflory pacjenta w celu ustalenia prawidłowej diagnozy, a także opracowania prawidłowego przebiegu leczenia. Pomaga w tym antybiogram, który pokaże aktywność leków przeciwko patogenowi.
Analiza bakterii jest wykorzystywana w laboratorium do wykrywania groźnych chorób, takich jak gruźlica, nawracająca gorączka czy rzeżączka. Służy również do badania składu bakteryjnego migdałków, jam narządów.
Bateriologiczna metoda badawcza może być wykorzystana do określenia skażenia środowiska. Na podstawie danych o składzie ilościowym i jakościowym wymazu z powierzchni obiektu określa się stopień populacji tego środowiska przez mikroorganizmy.
