WZW typu C to infekcja wątroby wywołana przez wirus Flaviviridae HCV, który składa się z jednej lub więcej cząsteczek RNA. Z reguły podejmuje się szereg środków diagnostycznych w celu ustalenia u pacjenta zapalenia wątroby typu C. PCR to analiza, która dokładnie potwierdza diagnozę. Często lekarze wyciągają wnioski, gdy pacjent ma już pierwsze oznaki choroby.
Co to jest wirusowe zapalenie wątroby typu C
Uszkodzenie wątroby przez infekcję wirusową przenoszoną przez krew lub kontakt seksualny nazywa się w medycynie wirusowym zapaleniem wątroby typu C. Czynnikiem sprawczym jest zawierający RNA wirus niekomórkowych czynników zakaźnych z rodziny Flaviviridae. Infekcja może pozostawać w organizmie przez długi czas bez ujawniania się. Dlatego tylko w przypadku wykrycia drobnoustroju za pomocą badania krwi przy użyciu PCR RNA RNA, zapalenie wątroby typu C (jako diagnoza) jest uważane za uzasadnione.
Flaviwirus nie jest wytwarzany w sztucznie wyhodowanych izolowanych komórkach. W procesie rozmnażania czynnik zakaźny tworzy odrębne immunologicznie modyfikacje. Czynniki te uniemożliwiają organizmowi dawanieodpowiednia reakcja ochronna, a eksperci mają trudności z opracowaniem skutecznej szczepionki.
Wirus jest przenoszony pozajelitowo. W przypadku infekcji musi przedostać się w wystarczających ilościach bezpośrednio do krwioobiegu.
Jakie badania wykonuje się na zapalenie wątroby typu C
Wirusowe patologie wątroby są diagnozowane za pomocą testów laboratoryjnych. Badania kliniczne zapalenia wątroby typu C są przeprowadzane poprzez badanie obcych i niebezpiecznych antygenów lub związków białkowych (przeciwciał) w biomateriale pacjenta, głównie we krwi.
- Enzymatyczny test immunologiczny (ELISA). Metoda opiera się na wykrywaniu przeciwciał IgG we krwi. Immunoglobulina jest uważana za największą i jest pentamerem. Przejawia się w pierwotnej odpowiedzi ochronnej limfocytów na nieznaną obcą substancję.
- Radioimmunoassay (RIA) - ilościowe oznaczanie immunoglobuliny IgG przy użyciu znakowanego radioaktywnego izotopu jodu.
- PCR zapalenia wątroby typu C - oznaczanie wirusowego RNA w biomateriale (krew). Ta analiza rzetelnie potwierdza diagnozę.
Testowanie IgG nie jest wiarygodne. Jego obecność w surowicy krwi może wskazywać nie tylko na obecność flawiwirusa, ale także inną przeszłą infekcję, która ma ten sam patogen.
Co decyduje o analizie PCR
Łańcuchowa reakcja polimerazy (PCR) opiera się na identyfikacji regionów DNA specyficznych dla określonych patogenów w próbkach materiału do badań (nabłonek, krew). Analiza umożliwia identyfikację najmniejszych patogennych organizmów (wirusów) poprzez wykrywanie ich RNA lub DNA w materiale biologicznym.
Procedura laboratoryjna wykrywania przeciwciał wirusowego zapalenia wątroby typu C PCR jest przeprowadzana w 3 etapach:
- Wybierz. Badany biomateriał jest oczyszczany z zanieczyszczeń, a DNA jest uzyskiwane w fazie ruchomej kolumny chromatograficznej.
- Wzmocnienie. Analiza odbywa się w cyklerze urządzenie-termostat. Nagrzewa i chłodzi probówki z określoną cyklicznością. W jednym badaniu wykonuje się do 35 cykli. Rezultatem jest wystarczająca liczba fragmentów DNA do wykrycia, identyfikacji i oceny patogenu.
- Elektroforeza. Powstałe fragmenty umieszcza się w żelu o różnym nasyceniu agarozy i przeprowadza elektroforezę. Otrzymany elektroforogram jest analizowany na komputerze.
Wykorzystywane jest nie tylko standardowe badanie PCR, ale także analiza Real Time PCR. To jest diagnostyka w czasie rzeczywistym. Metoda pozwala na analizę jakościową i ilościową, co pozwala zidentyfikować powstawanie i dynamikę choroby, a także przepisać terapię mającą na celu wyeliminowanie przyczyny powstania patologii. Real-time PCR jest również używany do oznaczania czystej kultury czynników zakaźnych (genotypowanie).
Jak przebiega test reakcji łańcuchowej polimerazy
Do diagnozy można użyć dowolnego ludzkiego płynu biologicznego. Biomateriałem do badań w kierunku WZW typu C jest zazwyczaj krew.
Pobieranie próbek do diagnostyki odbywa się w procedurzegabinet. Do pobrania krwi używaj jednorazowych probówek z substancją hamującą krzepnięcie krwi. Działania skoncentrowane na zapobieganiu rozprzestrzenianiu się czynników zakaźnych pomagają uniknąć przedostawania się innego szczepu drobnoustrojów z zewnątrz.
Krew do PCR wirusa zapalenia wątroby typu C jest pobierana rano na pusty żołądek. Próbka jest natychmiast wysyłana do laboratorium. Dopuszcza się przechowywanie biomateriału w temperaturze od +4 do +8 stopni Celsjusza. Pojemniki są oznakowane i zaopatrzone w wskazówki. Wyniki testu są dostępne w ciągu 48 godzin, czasem wcześniej.
Rodzaje PCR
Zakres zastosowania reakcji łańcuchowej polimerazy jest dość szeroki. Infekcjoniści określają za pomocą PCR zapalenie wątroby typu B, choroby przenoszone przez owady ssące krew, AIDS, gruźlicę. W onkologii przy użyciu tej metody komórki nowotworowe są wykrywane na wczesnym etapie.
Istnieje około czternastu rodzajów analiz. Zastosowanie jednego lub drugiego typu zależy od zakresu i końcowych wyników analiz. Niektóre rodzaje PCR są niezbędne, gdy wynik jest potrzebny w ciągu 20 minut.
Do diagnozowania wirusowego zapalenia wątroby typu C stosuje się 3 rodzaje reakcji łańcuchowej polimerazy:
- Ocena jakościowa może być pozytywna, wskazująca na obecność infekcji w organizmie, lub negatywna, wskazująca na brak flawiwirusa.
- Real-time PCR (analiza ilościowa) - określa ilościowe RNA patogenu w IU/ml.
- Genotypowanie to analiza, która ujawnia typ (genotyp) wirusa.
Aby dokładnie zidentyfikować i określić chorobę, a następniewszystkie trzy rodzaje badań są wykorzystywane do przepisywania optymalnej terapii.
Jakościowa analiza reakcji łańcuchowej polimerazy
Analiza jest obowiązkowa dla każdego, kto przeszedł test ELISA, który wykrył przeciwciała przeciwko HCV. Jakościowa reakcja PCR na zapalenie wątroby typu C jest standardowym testem wrażliwości. Metoda ma na celu wyłącznie wykrywanie, nie wykonuje się zliczania ani izolowania innych substancji.
W celu wykrycia przeciwciał stosuje się specjalne systemy testowe o progu czułości co najmniej 50 IU/ml. W przypadku wykrycia przeciwciał zaleca się inne testy wyjaśniające. Jeśli wynik jest negatywny, dalsze testy nie będą wykonywane.
W niektórych przypadkach wynik fałszywie ujemny może być spowodowany niekompetentnym personelem laboratorium lub niską jakością odczynników. W przypadku ubezpieczenia lepiej powtórzyć analizę w innym miejscu.
Ilościowy PCR
Metoda służy do bezpośredniego badania liczby flawiwirusów w jednym cyklu reakcji. Do dokładnego pomiaru stosuje się fragmenty DNA używane do hybrydyzacji lub startery znakowane fluorescencyjnie. Istnieje ekonomiczna opcja wykrywania przy użyciu barwnika SYBL Green. Barwnik jest wciśnięty w mały rowek w DNA i zmienia kolor na niebieski po naświetleniu laserem.
Stężenie jest określane przez urządzenie-wzmacniacz w ekwiwalencie cyfrowym. Wartości mogą się nieznacznie różnić w poszczególnych laboratoriach i dlatego należy je porównać z wartościami referencyjnymi.
Ilościowy PCRzapalenie wątroby typu C pomaga dobrać optymalną dawkę leków i określić czas trwania terapii. Częstotliwość badań zależy od stadium choroby, rodzaju genotypu i przepisanego przebiegu leczenia.
Określenie genotypu
Wirus zapalenia wątroby typu C ma zmienny skład genetyczny. Liczne modyfikacje uniemożliwiają stworzenie szczepionki, a także komplikują terapię. W sumie zidentyfikowano i zarejestrowano 11 genotypów i 100 podtypów. W krajach byłego ZSRR u osób zakażonych wirusowym zapaleniem wątroby typu C PCR wykrywa głównie genotypy 1b i 3.
W obecności któregokolwiek z genotypów marskość wątroby lub rak wątroby mogą igrać. Dlatego tak ważne jest, aby wykryć wirusa na czas.
Dla niektórych pacjentów niektóre leki przeznaczone do zwalczania HCV są toksyczne. Genotypowanie pozwala określić rodzaj białka i przepisać skuteczny lek.
W wynikach testów typowania znajduje się liczba z małą literą łacińską wskazującą na genotyp wirusa. Jeśli HCV zostanie wykryty, ale nie wpisany, oznacza to, że osoba ma genotyp, który nie jest typowy dla określonego obszaru geograficznego.
Wyniki analizy
Rozszyfrowaniem wyników zajmuje się lekarz. Tylko dane z kilku badań (wraz z wywiadem i badaniem) mogą dać ogólny, prawdziwy obraz historii medycznej.
- U zdrowej osoby test na reakcję jakościową w biomateriale niczego nie wykrywa. Jeśli wskazana jest wartość „wykryto”, infekcja jest potwierdzona, a pacjentwymaga dalszej diagnozy, a następnie leczenia.
- Określenie liczby czynników zakaźnych umożliwia ocenę miana wirusa w organizmie. Zwykle ilościowy PCR wirusa zapalenia wątroby typu C nie wykrywa patogenu. Wskaźnik do 810^5 jest uważany za niski ładunek i przy odpowiedniej terapii gwarantuje korzystny wynik. Wyższe wartości wymagają dogłębnego zbadania i ustalenia długotrwałej terapii, za której pozytywny wynik nikt nie może ręczyć.
- Pozytywne wyniki genotypowania wskazują, który genotyp jest rozpoznawany. Wynik ujemny wskazuje albo na brak flawiwirusa, albo na obecność genotypu, który nie jest typowy dla tego regionu.
Co wskazuje pozytywny wynik testu PCR
Każda poważna choroba wymaga kompleksowej diagnozy. Dodatni wynik PCR na zapalenie wątroby typu C potwierdza diagnozę, ale prognozy można poczynić dopiero po dodatkowych badaniach laboratoryjnych i instrumentalnych.
Wykrycie wirusa nie daje pełnego obrazu patologii. Konieczne jest określenie jego rodzaju i charakteru, określenie, jak wpływa na wątrobę i inne narządy. Wczesne wykrycie HCV często ma korzystny wynik terapeutyczny.
Ujemny PCR z pozytywnym testem ELISA
Obserwując objawy charakterystyczne dla uszkodzenia wątroby, istnieje duże prawdopodobieństwo, że infekcja już dostała się do organizmu. Dlatego powinieneś skontaktować się z hepatologiem lub specjalistą od chorób zakaźnych. Podczas wywiadów specjalista zbiera anamnezę i przepisuje niezbędne badanie.
Jeśliwyniki badań nad wirusowym zapaleniem wątroby typu C PCR są ujemne, a test immunoenzymatyczny dodatni, co wskazuje na obecność przeciwciał przeciwko flawiwirusowi we krwi. Zwykle dzieje się tak, gdy infekcja wnika do organizmu w niewielkiej ilości, więc układ odpornościowy poradził sobie z nią samodzielnie. Ale tacy ludzie są nadal uważani za zarażonych i muszą być badani co 6 miesięcy. Jeśli przy takich wynikach badań odmówiono osobie bezpłatnego badania lekarskiego, lepiej wykonać odpłatną PCR, aby zachować zdrowie, a jeśli wyniki są pozytywne, skontaktować się ze specjalistą w celu diagnozy i leczenia.
Wady i zalety metody
Przy ustalaniu diagnozy zapalenia wątroby typu C, PCR ma kilka zalet:
- Wczesne wykrycie patogenu.
- Dokładna definicja wirusa.
- Skuteczność diagnostyki.
- Minimalny wskaźnik błędów.
- Wysoka czułość.
Wady metody:
- Wysokie koszty analizy. Test wymaga drogiego sprzętu, odczynników i wysoko wykwalifikowanej kadry medycznej. Wszystko razem składa się na znaczną kwotę.
- Rygorystyczne wymagania dotyczące transportu biomateriałów.
Leczenie zapalenia wątroby
Analiza PCR pod kątem wirusa zapalenia wątroby typu C jest uważana za fundamentalną dla diagnozy, ale nie ostateczną. Aby terapia była skuteczna, wymagane są dodatkowe badania laboratoryjne i instrumentalne. Po przejściu wszystkichśrodki diagnostyczne lekarz zaleci leczenie:
- Dieta nr 5 jest przepisana.
- Alkohol jest całkowicie wykluczony.
- Wspólne przyjmowanie interferonu i rybawiryny przez 25 dni.
- Kursy hepaprotektorów „Essentiale”, „Karsil”, „Phosphogliv”.
- W szczególnych przypadkach stosowana jest dyskretna plazmafereza.
Leki przepisane przez hepatologa są stosowane regularnie, bez zmiany dawkowania. Czas przyjmowania leków ustala lekarz po przejściu testów kontrolnych. Po zakończeniu kuracji należy co sześć miesięcy odwiedzać lekarza.
PCR-diagnostyka pozwala na wczesną identyfikację czynnika sprawczego WZW typu C. Przyczynia się to do skuteczności terapii i zapobiegania przechodzeniu choroby do tak groźnych postaci jak marskość i rak wątrobowokomórkowy.
